Он участвовал в двух войнах: Финской (1939–1940) и Великой Отечественной (1941–1945). Окончив студию клоунады при Московском государственном цирке, проработал в цирке на Цветном бульваре пятьдесят лет. В 1981 году стал его главным режиссером, а в 1982 году — директором.
Дебютной работой в кино стала небольшая роль в картине «Девушка с гитарой», в которой он исполнил роль незадачливого пиротехника. Народная любовь пришла после роли Балбеса в комедиях «Пес Барбос и необычный кросс» (1961), «Самогонщики» (1961), «Операция «Ы» и другие приключения Шурика» (1965) и «Кавказская пленница, или Новые приключения Шурика» (1967).
Многогранность таланта позволила Юрию Никулину реализоваться и в других жанрах. Он снялся более чем в 40 фильмах, играя как комедийные, так и драматические роли. Особенно следует отметить военные драмы «Они сражались за родину» (1975) и «Двадцать дней без войны» (1976), ставшие одними из лучших картин с участием актера.
Любимый всеми клоун и актер, Юрий Никулин, был к тому же знаменитым острословом и собирателем анекдотов. Телевизионная передача «Белый попугай» и великолепный сборник «Анекдоты от Никулина» появились благодаря этому увлечению.
